初二（4）班 王玺 剧慧静 李凌光
指导教师：苏丽丽 张华 唐占兴
一、选题目的：
2000年10月12日，我们花卉科研小组的同学在石家庄市花卉园参观时看到了一种名叫“彩色马蹄莲”的花卉，其艳丽的花色令我们惊诧万分。从河北师大生物系了解到：彩色马蹄莲（Zantedeschia aethiopica）属天南星科，马蹄莲属植物，其花型为肉穗型花序，包于红黄粉红桔红橙黄或红黄色佛焰苞内，多数彩色马蹄莲的绿叶带月白色斑点或条纹，可作为有较好观赏价值的配叶材料，由于花叶皆佳，在国内外市场流行，是名贵的观赏花卉和切花,具有较高的观赏价值和经济价值。但传统的彩色马蹄莲分割块茎繁殖法，繁殖速度较慢、繁殖系数较低。我想能不能利用生物课上学习的细胞的全能性原理，高效、快速繁殖这种名贵花卉，使它更好的为人们服务，在老师和河北师范大学生物系沈教授的帮助下，从花卉园买回由北京引进的４个彩色马蹄莲品种开展了组织培养研究实验。
二、实施过程：
１．配置培养基：
原料：
以MS为基本培养基：
糖：３％
琼脂：０.7％
添加剂(mg/L)诱导培养基：BA2+NAA0.1和BA1+NAA0.1
增殖培养基：BA0.5+NAA0.5 和BA0.2+NAA0.2
生根培养基：IAA0.2+NAA0.3 NAA0.5和NAA0.1
步骤：
（在外温度260C左右，每天光照10－12小时下培养。）
２．选取外殖体：
将彩色马蹄莲块茎刷洗干净，刮去芽表褐色皮层，挖取0.5cm2左右的生长芽或芽眼放入洗衣粉水中充分漂洗，然后在0.1%的HgCl2中浸泡消毒15－20分钟，切取四周少许组织放入2%的次氯酸钠溶液中消毒15－20分钟，转入１%的次氯酸钠溶液中消毒15－20分钟，无菌水中漂洗三次，除去残留消毒液，接种在诱导培养基中。
三、结果与分析：
1 外殖体灭菌的最佳方法：
表1：芽眼在不同灭菌时间的萌发率和成芽率
|
|
芽眼总数 |
萌发个数 |
成芽个数 |
污染个数 |
萌发率 |
成芽率 |
污染率 |
|
15分 |
36 |
6 |
14 |
15 |
16.7% |
38.9% |
41.7% |
|
18分 |
36 |
8 |
16 |
11 |
22.2% |
44.5% |
30.6% |
|
20分 |
36 |
10 |
17 |
9 |
27.8% |
47.2% |
25% |
芽眼在各种消毒液中分别灭菌15、18、20分钟表明，灭菌时间短，污染严重，萌芽率和成芽率低，随着灭菌时间的增加，污染减少，但死芽增多，以18—20分钟的效果较好，成芽率可达45%-47%，污染率较高，可能是由于材料来自于土，其体内微生物含量高所引起。
2芽眼的诱导与增殖：
将接种于BA1+NAA0.1培养基上的部分单芽切去叶片为对照，部分分切成两半，分别接种于诱导培养基BA２+NAA0.1和BA1+NAA0.1。诱导培养表明（表2）培养基BA２+NAA0.1较BA1+NAA0.1产生的丛芽多，说明高浓度的BA较低浓度的BA易诱导丛芽及愈伤组织产生，单芽对半切较不切的更易诱导出从芽及愈伤组织。继续培养60天后，大部分芽块基部形成致密具绿色芽点的愈伤组织块，并有大量不定小芽长出，较大的不定芽高达2厘，在诱导培养基BA1+NAA0.1中形成的不定芽有根的分化，诱导培养基BA２+NAA0.1则无。芽眼萌发的原生芽与愈伤组织分化的不定芽植株无明显差异。
BA浓度对单芽的诱导
|
处理 |
培养基 |
芽块数 |
30天分化从芽数 |
60天分化从芽数 |
|
单芽切半 |
BA２+NAA0.1 |
20 |
10 |
20 |
|
单芽不切 |
BA２+NAA0.1 |
20 |
3 |
16 |
|
单芽切半 |
BA1+NAA0.1 |
20 |
3 |
16 |
|
单芽不切 |
BA1+NAA0.1 |
20 |
1 |
10 |
3激素浓度对马蹄莲增殖的影响
诱导的从芽和带绿色芽点的愈伤组织块在诱导培养积极增殖培养基，继代增殖表明（表２）在培养基添加BA１+NAA0.１ BA0.5+NAA0.5 和BA0.2+NAA0.2，均有较多的根系分化，培养基加BA２+NAA0.１ 以愈伤组织及芽点增殖为主，根和芽的分化较少，在培养基加BA１+NAA0.１中，既有丛生芽增殖，又有愈伤组织的产生，芽的分化及生长也较好，在培养基加BA0.5+NAA0.5中，愈伤组织的分化较少，主要是从芽的增殖及芽的分化生长，因此培养基中加BA0.5+NAA0.5 和BA１+NAA0.１适于生根和生长同时进行，，二者轮流使用效果更佳，且苗的长势良好。总之，BA的浓度高，利于愈伤组织的增殖，不利与芽的分化，随着BA浓度降低，并适当增加生长素浓度，可促进愈伤组织分化成苗及生根，这与细胞分裂素与生长素浓度比控制组培苗繁殖于生根的规律一致。
培养基与芽的增殖分化
|
培养基 |
块数 |
接种芽每块分化苗（个） |
增殖瓶数 |
愈伤块 |
带绿色芽 点每块分化苗 |
苗高（cm） | |||
|
BA2+NAA0.1 |
20 |
1 |
6 |
15 |
1 |
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